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Smart-seq2和10x这两个单细胞技术是现在初学者进入单细胞领域最需要掌握的,它们代表着单细胞的两个全然不同的发展策略。
绝大部分的技术原理介绍会从 单细胞悬浮液制备到测序细节面面俱到,其实并不那么的初学者友好,最近有粉丝在公众号后台留言说他们的博士课程有一个思考题是:简要概述smart-seq2和10x技术的单细胞差异。
然后他给大家推荐了一个高度精炼的综述,这个综述于2020年9月发表在 《Experimental & Molecular Medicine》杂志,标题是:《Single-cell sequencing techniques from individual to multiomics analyses》,链接是:https://www.nature.com/articles/s12276-020-00499-2
可以看到,smart-seq2技术依赖于C1这个仪器,每次都是96个细胞一起测序,每个细胞的测序量这个综述可能是写错了,应该是1M-10M为佳,不太可能是100-1000个M,最重要的是它是整个RNA分子的全长测序,每个细胞都是独立的测序。
但是10X呢,每次可以测好几千的细胞,每个细胞只需要5-10K的reads,而且仅仅是测RNA分子的一段即可,全部的细胞都混合在一起,虽然说有barcode可以区分。
这样的基础认知,也可以看基础10讲:
01. 上游分析流程 02.课题多少个样品,测序数据量如何 03. 过滤不合格细胞和基因(数据质控很重要) 04. 过滤线粒体核糖体基因 05. 去除细胞效应和基因效应 06.单细胞转录组数据的降维聚类分群 07.单细胞转录组数据处理之细胞亚群注释 08.把拿到的亚群进行更细致的分群 09.单细胞转录组数据处理之细胞亚群比例比较
最基础的往往是降维聚类分群,参考前面的例子:人人都能学会的单细胞聚类分群注释